Maya Eksprese Eden Rekombinant Proteinlerin Berraklaştırılması ve Ultrafiltrasyonu İçin Verimli ve Düşük Maliyetli Bir Süreç

Ekzojen genlerin maya ekspresyonu yalnızca rekombinant proteinler ve peptidler, antikorlar ve aşılar, sitokinler, büyüme faktörleri, hormonlar ve diğer biyoaktif maddeler üretmekle kalmaz, aynı zamanda geniş uygulama potansiyeli olan endüstriyel enzimler, fonksiyonel gıdalar ve biyolojik materyaller üretmek için de kullanılabilir. .

 

Maya ekspresyon sistemi, yaygın olarak kullanılan iki ekspresyon sistemini, yani saccharomyces cerevisiae ekspresyon sistemini ve metanotrofik maya ekspresyon sistemini içerir. Metanol maya ekspresyon sistemi şu anda en yaygın kullanılan maya ekspresyon sistemidir ve metanolü karbon ve enerji olarak kullanabilen Pichia en yaygın kullanılanıdır. Ayrıca Hansen mayası, Sphaeroides vb. vardır.

 

Hangi tür maya ekspresyon sistemi olursa olsun, aşağı yöndeki ayırma ve saflaştırma işlemleri benzerdir ve spesifik proses akışı, rekombinant proteinlerin ve polipeptit ilaçların maya ekspresyonunu örnek olarak alır.

 

Kılavuz mikrofiltrasyon membran kasetleri, maya fermantasyon sıvısı ve E. coli kırma sıvısı gibi karmaşık besleme sıvısını yüksek hızda etkili bir şekilde işleyebilen ve küçük testten üretim ölçeğine kadar doğrusal amplifikasyon sağlayabilen açık akış kanalı ve teğetsel akış filtreleme modunu benimser. Kompakt modüler tasarım, basit boru hattı bağlantısı, sistemin bağımsızlığı ve okunabilirliği, operatörleri koruyabilir ve biyolojik kirliliği önleyebilir. Ve bakım ve temizlik doğrulaması yok. Bu nedenle erken alt proseslerin açıklama adımı için çok uygundur.

 

UF/DF işleminin temel amacı safsızlıkları gidermek ve tamponları yerinden çıkarmaktır. Kılavuz ultrafiltrasyon membran kaseti, membran gözenek boyutunda iyi bir homojenliğe ve güçlü hidrofilikliğe sahiptir; bu, membrana daha yüksek akış ve daha düşük protein adsorpsiyonu ve daha küçük basınç düşüşü, kolay malzeme aktarımı ve filtrasyon süresini önemli ölçüde kısaltarak optimize edilmiş akış kanalı tasarımı sağlayabilir. Üstelik ürün serisi, farklı ölçeklerdeki çeşitli uygulamaların ihtiyaçlarını karşılayacak şekilde eksiksiz ve esnektir. Bu nedenle, sonraki işlemenin UF/DF adımı için çok uygundur.

 

Kılavuz membranın uygulama durumu aşağıdadırkasetrekombinant proteinlerin maya ekspresyonunda.

 

Mikrofiltrasyon açıklaması

Mikrofiltrasyon yoluyla 1,5 L maya fermantasyon sıvısını (hedef protein molekül ağırlığı 42-55 KD) berraklaştırmak için {{0}},11 metrekare 0,22μm gözenekli membran kaseti kullandık. Mikrofiltrasyon sürecinin tamamında hedef proteinin geri kazanım oranı, bulanıklık değişimi ve membran akı tükenmesi araştırıldı.

0-17dakika konsantrasyon işlemidir, 17-32dakika yıkama ve filtreleme işlemidir. Tüm mikrofiltrasyon süreci boyunca TMP kademeli olarak arttı, sıvı giriş hızı değişmedi ve ortalama malzeme akışı 45LMH oldu.

Sıvının bulanıklığı mikrofiltrasyondan önce 600NTU, mikrofiltrasyondan sonra 8NTU idi ve bulanıklık bariz bir şekilde değişti.

Sonuçlar, hedef protein veriminin >%90 olduğunu gösterdi. Kılavuz Teknolojisi 0,22μm membran kaseti stabildir ve bu uygulama senaryosu için uygundur.

 

Ultrafiltrasyon konsantrasyonu

 

 

Sonuçlar hedef proteinin tamamen yakalandığını gösterdi. Kılavuz Teknolojisi 10kd membran kasetleri stabil bir şekilde çalışabilir ve bu uygulama senaryosu için uygundur.

Maya tarafından ifade edilen rekombinant proteinlerin çoğu yüksek düzeyde ifade edilmemiştir. Filtrelenen sıvının bulanıklığı bariz bir şekilde azaldı ve protein geri kazanım oranı daha yüksek oldu. Sonraki kromatografik süre çok uzun olduğundan, protein üzerinde olumsuz etkilere neden olacaktır; kromatografik örnekleme süresini kısaltmak için bir adım ultrafiltrasyon konsantrasyonu eklenebilir ve hedef protein, numuneden sonra hızlı bir şekilde konsantre edilebilir. zamandan tasarruf etme, dolgu hacmini azaltma ve dolayısıyla üretim maliyetini azaltma amacına ulaşın.

 

Kılavuz Teknolojisi mikrofiltrasyon membran kasetleri genellikle besleme sıvısının bulanıklığını 20NTU'nun altına düşürebilir ve daha sonraki ultrafiltrasyon ve kromatografinin ihtiyaçlarını tam olarak karşılayabilir. Ultrafiltrasyon membran kasetlerinin ultrafiltrasyon geri kazanım oranı, farklı malzemelere bağlı olarak değişiklik gösterecektir; genel geri kazanım oranı %90-95'ye ulaşabilir.

Guidling Technology, ilgili değerlendirme için test kitleri talep etmenizi memnuniyetle karşılar.

 

Rehberlik Hakkında

Guidling Technology, biyofarmasötikler, hücre kültürü, biyomedikalin saflaştırılması ve konsantrasyonu, teşhis ve endüstriyel sıvılara odaklanan ulusal bir yüksek teknoloji kuruluşudur. Biyofarmasötikler, hücre kültürü vb. uygulama senaryolarını tam olarak karşılayan santrifüj filtre cihazlarını, ultrafiltrasyon ve mikrofiltrasyon kasetlerini, virüs filtresini, TFF sistemini, derinlik filtresini, içi boş fiberi vb. başarıyla geliştirdik. Membranlarımız ve membran filtrelerimiz, ön filtreleme, mikrofiltrasyon, ultrafiltrasyon ve nanofiltrasyonun konsantrasyonu, ekstraksiyonu ve ayrılmasında yaygın olarak kullanılmaktadır. Küçük, tek kullanımlık laboratuvar filtrelemesinden, üretim filtreleme sistemlerine, sterilite testlerine, fermantasyona, hücre kültürüne ve daha fazlasına kadar birçok ürün grubumuz, test ve üretim ihtiyaçlarını karşılamaktadır. Guidling Technology sizinle işbirliği yapmayı dört gözle bekliyor!