DTP Aşısının Üretim Sürecinde Ultrafiltrasyon Uygulaması

UygulamaUltrafiltrasyonPüretimPsüreciDTP Vakne

 

1. DTP Aşısı

Yaygın olarak boğmaca olarak bilinen boğmaca, Bordetella pertussis'in neden olduğu, öncelikle bebekleri ve küçük çocukları etkileyen akut solunum yolu bulaşıcı bir hastalıktır. Solunum damlacıkları yoluyla bulaşır ve 7 ila 10 günlük bir kuluçka süresi vardır. Hastada öksürük de dahil olmak üzere balgam birikimi belirtileri gelişecektir. Difteri, Corynebacterium diphtheriae'nin neden olduğu akut bir solunum yolu enfeksiyonudur. Bakteriler burun mukozasını veya boğazı istila eder, çoğalır, ekzotoksin üretir ve lokal inflamasyona ve doku nekrozuna neden olur. Clostridium tetani'nin neden olduğu tetanoz, insan vücuduna deri veya mukoza yaralarından girer. Anaerobik koşullarda gelişir ve spazmodik kas kasılmalarını tetikleyen toksinler üretir.

DTP aşısı, Bordetella pertussis, difteri toksini ve tetanoz toksininin etkili bileşenlerini belirli oranlarda karıştırılarak bir alüminyum hidroksit adjuvanına adsorbe edilmiş bir kombinasyon aşıdır. Üç hastalığın önlenmesinde kullanılır: boğmaca, difteri ve tetanoz.

 

2. DTP Aşısının Üretim Süreci

DTP aşısı tipik olarak inaktif bir aşıdır. DTP aşısının hazırlanması, öncelikle güvenlik nedeniyle inaktif aşı üretim sürecini takip eder. Şu anda Çin'de DTP aşılarının üretim süreci büyük ölçüde 1970'ler ve 1980'lerdeki teknolojiye dayanıyor. Ancak süreç boyunca diyaliz adımları çok fazla geleneksel filtreleme aşamasını içeriyordu ve bu da ürünün genel üretim sürecini önemli ölçüde etkiliyor. Açık kanallara sahip teğet akışlı membran filtrasyon ürünleri, biyolojik ürünlerin aşağı yönde ayrılmasında düşük kesme kuvvetleri ve yüksek geri kazanım oranları gibi avantajlar sunar. Özellikle yüksek konsantrasyonlu, yüksek viskoziteli ve yüksek partikül içeriğine sahip numunelerin ayrılması için uygundurlar ve bu da onları DTP aşılarının üretim prosesine uygun hale getirir.

3. Hücresiz DTP Kombine Aşı Antijen Sıvısının Saflaştırma Sürecinde İçi Boş Fiber Ultrafiltrasyon Teknolojisinin Uygulanması

(1)Malzemeler ve Yöntemler

①Örnek

Dekontamine edilmiş ve rafine edilmiş hücresiz DTP antijen solüsyonu (bundan sonra dekontamine edilmiş antijen solüsyonu olarak anılacaktır).

②Ana Reaktifler ve Cihazlar

Enjeksiyon dereceli su; sodyum klorür (farmasötik sınıf); diyaliz çantası; 10kDa içi boş fiber; peristaltik pompa.

③Hücresiz DTP Antijen Sıvısının Ultrafiltrasyonu ve Saflaştırılması

Her şeyden önce, 10kDa'lık içi boş bir fiber kullanarak, dekontamine edilmiş antijen çözeltisini başlangıç ​​hacminin yaklaşık 5- katına kadar konsantre edin. Daha sonra filtreleme ve yıkama işlemine başlayın. Daha sonra, süzüntü hacmi başlangıç ​​hacminin yaklaşık 4 ila 5 katına ulaştığında filtrasyonu durdurun. Son olarak, tüm sistemi durulayın ve hacmin 1- katı fizyolojik salin kullanarak süzüntüyü geri kazanın.

④Hücresiz DTP Antijen Sıvısının Diyaliz ve Saflaştırılması

Dekontamine edilmiş antijen solüsyonunu aseptik olarak diyaliz torbalarına paketleyin ve 0.85% steril sodyum klorür solüsyonuna batırın ve ardından diyalizi 2-8 derecede gerçekleştirin.

⑤Saflaştırılmış Sıvının Tanımlanması

Ultrafiltrasyon ve diyalizle geri kazanılan sıvı numunelerini orantılı olarak ön saflaştırma hacmine geri yükleyin. Dekontamine edilmiş antijen solüsyonunu kontrol olarak kullanın ve %12 SDS-PAGE kullanarak numunelerin saflığını analiz edin. Solüsyonlardaki katı içeriği ölçün ve numuneleri 10,000 rpm'de 15 dakika süreyle santrifüj ettikten sonra geri kazanım oranını hesaplayın.

Sonuçlar

①İçi Boş Fiber Ultrafiltrasyon Konsantrasyon ve Yıkama

Ultrafiltrasyon konsantrasyon işlemi sırasında 70 dakika içinde 4.800 mL süzüntü elde edilir ve bunun sonucunda 5- kat konsantrasyon elde edilir. Filtrasyon hızı, ortalama 42 LMH (69,6 mL/dak) filtrasyon hızıyla sürekli olarak azalır. Yıkama işlemi sırasında 90 dakika içinde 5.300 mL süzüntü elde edilir, bu da 4.{11}} kat yıkamayla sonuçlanır ve filtrasyon hızı, ortalama 36 LMH (59.5 mL/dak) filtrasyon hızıyla sürekli olarak düşer. Son olarak tüm sistemi 1.200 mL fizyolojik salinle durulayın ve durulama solüsyonunu önceki yıkama solüsyonuyla (1.200 mL) karıştırın. Sıvının son konsantrasyon faktörü 2.5-kattır. Ultrafiltrasyonla karşılaştırıldığında diyaliz, diyalizatın beş kez değiştirilmesini gerektirir ve yaklaşık 6 gün sürer.

②Saflaştırılmış Sıvının Tanımlanması

SDS-PAGE analizi, hem ultrafiltrasyon hem de diyaliz yöntemleriyle saflaştırılan hücre içermeyen DTP aşı antijen sıvısının saflığının, aşağıdaki şekilde gösterildiği gibi nispeten değişmeden kaldığını ortaya çıkardı. Ultrafiltrasyon saflaştırmasının geri kazanım oranı, aşağıdaki tabloda belirtildiği gibi diyaliz saflaştırmasından biraz daha düşüktür.

Örnek	Katı İçerik(%)	Geri Dönüşüm Oranı(%)
Dekontamine Antijen Solüsyonu	0.872	/
Ultrafiltrasyonla Geri Kazanılan Sıvı (indirgenmiş)	0.803	92.1
Diyalizle Geri Kazanılan Sıvı (azaltılmış)	0.813	93.2

 

Çözüm

İçi boş elyaf ultrafiltrasyonu, gıda, fermantasyon, ilaç, çevre koruma ve kimya mühendisliği gibi endüstrilerde büyük moleküler maddelerin ayrılması, konsantrasyonu ve saflaştırılması için yaygın olarak kullanılan bir membran ayırma teknolojisidir. Bu deneyde, dekontamine edilmiş hücre içermeyen DTP antijen çözeltisini saflaştırmak için içi boş fiber ultrafiltrasyon teknolojisi kullanıldı. Deneyci, saflaştırma verimliliği ve iyileşme oranı açısından geleneksel diyalizle karşılaştırdı. Sonuçlar, ultrafiltrasyonun, detoksifiye edici ajanları ve pigmentleri uzaklaştırmada daha yüksek bir verime sahip olduğunu (diyaliz için 5-7 güne kıyasla 3 saat içinde elde edilebilir) ve daha yüksek bir iyileşme oranına sahip olduğunu gösterdi. Bunlar, hücresiz DTP aşı antijen sıvısının ultrafiltrasyonla saflaştırılması için içi boş fiber uygulamasının mümkün olduğunu göstermektedir. Mevcut diyaliz işlemlerinin yerini alabilir.