Monoklonal Antikor Aşağı Akış Sürecinin Virüs Temizleme Yeteneği Üzerine Çalışma
Hücre hatlarından türetilen biyoteknoloji ürünleri virüs kontaminasyonu riski altında olabilir; bu riskin kapsamı, hazırlama kaynağı, kullanılan hammaddeler, üretim sistemi, saflaştırma reaktifleri ve eksipiyanlar dahil olmak üzere bir dizi faktöre bağlıdır. Üretim sürecinde virüslerin uzaklaştırılması veya etkisiz hale getirilmesinin incelenmesi, patojenik virüslerin iatrojenik bulaşma potansiyelini ve dolayısıyla ürünlerin güvenliği için gerekli olan riski azaltmada önemli bir adımdır. Biyolojik ürünlerin klinik araştırmalara girmeden ve pazarlanmadan önce, üretim süreçlerinin bilinen ve varsayılan virüsleri ortadan kaldırma yeteneğine sahip olduğu kanıtlanmalıdır.
01 Monoklonal antikor ürünü virüs güvenliği değerlendirmesi
Virüs giderme kabiliyetine ilişkin araştırma, genellikle bilinen titre gösterge virüsünün farklı üretim aşamalarında ara ürüne eklenmesi, ardından belirli bir işlemle işlenen numunedeki kalıntı virüs titresinin belirlenmesi ve son olarak log azaltma değerinin (LRV) değerlendirilmesi yoluyla yapılır. virüs titresi. LRV için işlem adımları 4log10'dan büyük veya ona eşit, genellikle etkili virüs temizleme adımları olarak kabul edilir. LRV ile süreç<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.
Simüle edilmiş üretim süreci (indirgenmiş süreç) yöntemini kullanırken, mümkün olduğunca gerçek üretim süreciyle, özellikle de etkili üretim süreci adımlarıyla ilgili makul bir virüs temizleme/inaktivasyon araştırması ve test planı tasarlamak gerekir. Simüle edilen süreç, test parametreleri ve kontrol koşulları açısından gerçek süreçle kesinlikle tutarlı olmalıdır.
02 Genellikle virüsleri ve doğrulama şemalarını gösterir
Yaygın gösterge virüsleri Tablo 1'de gösterilmektedir.
Yeni ilaç uygulaması (IND) araştırma aşamasında, bir biyoteknoloji ürünü, tipik olarak bir retrovirüs (X-MuLV) ve bir parvovirüs (MMV) seçilerek en az 2 model virüs için viral temizleme çalışmaları gerektirir. Biyolojik lisans başvurusu (BLA) aşamasında, virüs temizleme çalışmaları genellikle 3-5 spesifik/spesifik olmayan virüsler kullanılarak yürütülür ve 3-5 işlem adımları, ürünün bir güvenlik faktörüne sahip olduğunu göstermek için değerlendirilir. virüs güvenliği perspektifi. Yurt içi ve yurt dışındaki farklı yönergelerden dolayı, beyanlarda kullanılan virüs temizleme doğrulama adımlarında bazı farklılıklar bulunmaktadır. mAb üretim sürecinde yaygın olarak kullanılan virüs temizleme doğrulama şemaları Tablo 2'de gösterilmektedir.
03 Aşağı akış süreçlerinin virüs temizleme yeteneği
3.1 Alt süreçlerin farklı virüsleri temizleme yeteneği
2009 yılı itibarıyla IND ve BLA, Protein A afinite kromatografisi, Düşük pH, anyon değişim kromatografisi AEX (akış penetrasyon modu), katyon değişim kromatografisi CEX (bağlanma - elüsyon modu) ve virüs temizleme validasyonu için FDA'ya sunulan monoklonal antikor ürünleri virüs filtrasyonu en sık kullanılan gösterge virüs aileleridir ve temizleme etkilerinin ortalama ve aralığı Şekil 1'de gösterilmektedir.
Retrovirüsler için, LRV'si yaklaşık 3log10 olan (Şekil 1'deki A-çubuk grafiğinde gösterildiği gibi) CEX hariç, diğer süreçler sağlamdı (LRV 4log10'dan büyük veya ona eşit). Herpesvirüsler ve retrovirüsler benzer temizleme etkilerine sahiptir ve LRV > 4log10'dur (Şekil 1'deki B çubuğu grafiğinde gösterildiği gibi). Parvovirüs gibi küçük zarfsız virüslerin etkili bir şekilde ortadan kaldırılması daha zordur, kimyasal işlemlere dirençlidir ve filtreler tarafından kolayca yakalanmaz (Şekil 1'deki C-çubuk grafiğinde gösterilmiştir). Parvoviridae'nin giderilmesinde yalnızca AEX ve küçük virüs filtreleri etkili olmuştur (ortalama LRV > 4log10).
Şekil 1'de gösterilen işlemler, ProteinA, AEX(akış penetrasyon modu), CEX(birliktelik-elüsyon modu), Düşük pH'lı inaktivasyon ("tamamlanmamış" ve "tamamlanmış" uzaklaştırma) ve büyük ve küçük açıklıklı devirüs filtrasyonudur.
3.2 Aşağı yönlü süreçlerin virüs temizleme kapasitesi üzerindeki etkileyen faktörleri
Her bir işlem için LRV değerlerinin dağılımı Şekil 2'de gösterilmektedir. Karşılaştırmalı analiz için 0 ~ 21og10 olan çalışmalar düşük LRV grubu olarak, 6log10'dan fazla olan çalışmalar ise yüksek LRV grubu olarak sınıflandırılmıştır.
3.2.1 ProteinA afinite kromatografisi
Protein A prosesinin LRV değeri ile denge/yıkama tamponu, dolgu maddesi, elüsyon bileşimi ve elüsyon pH değeri arasında anlamlı bir korelasyon yoktu. Düşük LRV grubunun ortak paydası, besleme stoğunun oldukça karmaşık olmasıdır ve besleme stoğu ile dolgu maddesinin karmaşık etkileşimi, kromatografik kolonun virüsleri giderme yeteneğini olumsuz yönde etkileyebilir.
3.2.2 AEX (Akış Modu)
Strauss ve ark. AEX numunelerinin pH'ının ve iletkenliğinin LRV'yi etkileyebileceğini gösterdi. Bununla birlikte, Miesegaes ve arkadaşlarının istatistiksel sonuçları, ProteinA'ya benzer şekilde, AEX'in LRV'sinin (akış penetrasyon modu) farklı tamponlar, dolgu maddeleri, pH ve iletkenlik ile önemli bir korelasyona sahip olmadığını gösterdi; bu, pH ve iletkenliğin optimizasyonundan kaynaklanıyor olabilir. rapor edilen vaka süreci koşullarında.
3.2.3 CEX(Bağlama - Elüsyon Modu)
CEX işlemiyle virüs temizleme yeterince güçlü değildir. Yüksek LRV grubundaki LRV ile tampon, deneyim düzeyi veya kolon yüksekliği ve reçine tipi gibi herhangi bir kromatografik kolon özelliği arasında anlamlı bir korelasyon yoktu. Bununla birlikte, yüksek LRV çalışmasında kullanılan denge/yükleme ve elüsyon pH değerlerinin her ikisi de 5,3±0,2 ile daha düşüktü; Düşük LRV grubunda pH 6.0±0.2 idi. Diğer bir faktör ise tampondaki tuz konsantrasyonunun da LRV değeri farkına neden olabilmesidir. Düşük LRV çalışmasında kullanılan tampon, yükleme/dengeleme çözeltisinde ortalama 290±120 mM ve elüentte 340±70 mM olmak üzere daha yüksek bir tuz konsantrasyonuna sahipken, yüksek LRV çalışmasında NaCl konsantrasyonları 58 mM idi. Sırasıyla ±27 mM ve 183±31 mM.
3.2.4 Düşük pH'ın etkisizleştirilmesi
Düşük pH işleminde, pH önemli bir işlem parametresidir ve 3,8'lik bir pH, retrovirüsün derece derece etkisiz hale getirilmesi için yeterlidir. Düşük LRV grubunun pH'ı 3,9'du, yüksek LRV çalışmasının pH'ı ise 3,4'tü.
3.2.5 Virüs Filtrelemeyi Kaldırma
Hem küçük hem de geniş açıklıklı filtreler için, MuLV gideriminin LRV değeri 2log10'dan az değildi ve çalışmaların yalnızca %1'i 3log10'un altındaydı (Şekil 2'de h ve i sütunlarında gösterilmiştir). Retrovirüslerin geniş açıklıklı virüs filtreleri tarafından genel temizlenmesi, küçük açıklıklı virüs filtrelerininkinden daha düşüktü (Şekil 1'deki C-çubuk grafiğinde gösterildiği gibi). Parvovirüs temizliğinin sonucunu etkileyen ana sebep, farklı filtre türleridir. Genel olarak anti-virüs filtrelemesi virüsleri güvenilir bir şekilde temizleyebilir.
İşlemler, Protein A(a), AEX penetrasyon modu (b), CEX bağlama - elüsyon modu (c), AEX bağlama Ⅰ elüsyon modu (d), Düşük pH inaktivasyonu ("eksik" ve "tam" temizleme)(e ~ g) ve büyük gözenek boyutu (h) ve küçük gözenek boyutu (i~j) devirüs filtrasyonu (burada, a~i: Retrovirüs; j: Parvovirüs).
04 Virüs güvenliği değerlendirmesindeki yenilikler ve zorluklar
Aşağı yönlü biyofarmasötik süreçler alanındaki sürekli gelişme ve yenilik, kaçınılmaz olarak virüs temizleme değerlendirmesinde yenilikleri beraberinde getirecektir. Sürekli akışlı biyoprosesler gibi yukarı ve aşağı proseslerdeki ilerlemeler, etkili ve sağlam virüs giderme proseslerinin değerlendirilmesini ve oluşturulmasını gerekli kılmıştır. Sürekli akış sırasında virüs etkisizleştirme ve virüs filtreleme gibi adımların yine de toplu modda gerçekleştirilmesi beklenir. Sürekli akış modundaki kromatografik proseslerin virüs giderme kapasitesinin, toplu prosesinkinden önemli ölçüde farklı olmamasına rağmen, verilerle desteklenmesi gerekmektedir.
05 Görünüm
Virolojik güvenlik açısından bakıldığında, biyofarmasötik endüstrisinin mükemmel güvenliği büyük ölçüde endüstrinin viral güvenlik için üç temel stratejiye sıkı sıkıya bağlı kalmasına bağlanabilir: malzeme ve hücre bankası kaynaklarının yeterli şekilde kaynaklanması ve test edilmesi, viral temizleme değerlendirmelerinin belgelenmesi (virüs doğrulama çalışmaları) ve süreç içi viral test. Yeni hücre substratları tarafından üretilen biyolojik ilaçların özellikleri farklı risklerle birlikte değişebilir ve biyolojik ilaçların güvenliğinin sağlanması için iyi risk yönetimi stratejileri gereklidir. Guidling Technology, küçük deneme, pilot deneme ve büyük ölçekli üretime kadar filtreleme sürecini kapsayan deneyimli profesyonel teknik ekibe sahiptir; membran ve membran filtrelerimiz, ön filtreleme, mikrofiltrasyon, ultrafiltrasyon, nanofiltrasyon konsantrasyonu, ekstraksiyon ve ayırma işlemlerinde yaygın olarak kullanılmaktadır; Küçük, tek kullanımlık laboratuvar filtrelemesinden üretim odaklı filtreleme sistemlerine, sterilite testlerine, fermantasyona, hücre kültürüne ve daha fazlasına kadar birçok ürün grubumuz üretkenliğin artmasını sağlar.
Jiuling, keşfetme yolunda "maliyetleri azaltın, verimliliği artırın" arayışı içinde, ilk gösterge olarak ürün kalitesini sağlamak için, sektörün zorluklarıyla yüzleşmek ve daha iyi bir gelişme aramak için gelecekte sizinle birlikte çalışmayı dört gözle bekliyor.
