Domuz İshal Aşısının Alt Saflaştırma Süreci

İshal, Çin'deki domuz endüstrisinde büyük ekonomik kayıplara neden olan üç büyük hastalıktan biridir. Domuzlarda ishale neden olan birçok faktör vardır ve en ciddileri viral faktörlerdir. Başta emziren domuz yavruları olmak üzere her yaştaki domuzlar enfekte olabilir ve enfeksiyon sonrası ölüm oranı %50'nin üzerine çıkabilir. Domuz salgın ishal virüsü (PEDV) ve domuz bulaşıcı gastroenterit virüsü (TGEV) dünyada yaygındır ve iki virüs tek başına veya kombinasyon halinde enfekte olabilir. Şu anda PEDV ve TGEV'yi tedavi edecek spesifik bir ilaç mevcut değildir ve domuz ishalinin önlenmesi ve kontrolü esas olarak ticari aşılardır.

Domuz salgını ishaline karşı geleneksel aşılar esas olarak tam virüs inaktive edilmiş aşı ve canlı zayıflatılmış aşıyı içerir. Klinik olarak, PEDV ve TGEV ikili inaktif aşı veya zayıflatılmış aşı ve PEDV, TGEV ve domuz rotavirüsü (RV) üçlü inaktive aşı veya zayıflatılmış aşı, çoğunlukla PEDV ve TGEV ikili aşı olmak üzere yaygın olarak kullanılır.

Şu anda Çin'de domuz salgını ishallerine karşı birçok aşı bulunmaktadır.

İnaktif ve zayıflatılmış aşıların üretim süreci benzerdir; temel olarak patojen kültürü, patojen inaktivasyonu veya zayıflatılmış, patojen ekstraksiyonu ve saflaştırılması, aşı hazırlama ve paketleme ve aşı kalite kontrolünden oluşan beş adımdan oluşur. Bu makale esas olarak patojen saflaştırma prosedürünü tanıtmaktadır.

Açıklama

Berraklaştırmanın amacı hücre artıklarının ve diğer büyük parçacık agregatlarının uzaklaştırılmasını sağlamaktır. Çeşitli zehirlerin hücre kültürü üretiminde, çok sayıda virüs parçacığı içermesinin yanı sıra, birçok hücre dokusu döküntüsü, metabolik ürün ve diğer safsızlıklar bulunur; bu da zehiri bulutlu veya yarı bulutlu hale getirir, doğrudan Bu zehir konsantrasyon işleminin kullanılması, kısa sürede ultrafiltrasyon membranının tıkanmasına neden olacak ve zehirin konsantrasyonunu tamamlayamayacaktır ve bu da ultrafiltrasyon membranının hurdaya ayrılmasıyla sonuçlanacaktır. Bu nedenle, zehir konsantre edilmeden önce, genellikle düşük hızlı santrifüjleme ve membran filtrasyonu ile yapılan, ilk önce arıtılması gerekir. Membran ayırma teknolojisi kullanıldığında, membran malzemesinin sıklıkla elektronegatiflik veya hidrofobik gruplara sahip olması nedeniyle, membran malzemesinin virüs parçacıklarına adsorbsiyona sahip olup olmadığının araştırılmasının gerekli olduğu unutulmamalıdır.

Etkili bir açıklama adımı, yüksek katı parçacık giderme kapasitesi ve yüksek ürün veriminin, kolay amplifikasyonun ve sonraki işlem birimlerinin korunmasının bir kombinasyonunu gerektirir. Şu anda arıtma işlemi için derin filtre kullanılmaktadır.

Ancak ekim ölçeği çok büyük olduğunda çok sayıda derin filtre membranı gerekli olacak ve bu da sarf malzemelerinin maliyetinde önemli bir artışa yol açacaktır. Aynı zamanda hücre kültürünün yüksek yoğunluğu, derin filtre membranının yükünü azaltacak, bu da maliyetlerin artmasına ve ürünün aşırı seyreltilmesine neden olacaktır.

Mikrofiltrasyon yöntemi esas olarak teğet akışlı filtreleme cihazını kullanır ve membran bileşenleri düz membran kaseti ve içi boş elyaftır. Teğetsel akış filtrasyonu (TFF), transmembran basınç farkı tarafından yönlendirilir. Membranın gözenek boyutundan daha küçük maddeler ve yabancı maddeler membrandan geçerken, daha büyük parçacıklara sahip hücreler gibi yabancı maddeler hapsedilir. Mikrofiltrasyon için kullanılan membranın gözenek boyutu {{0}}.45/0.22μm'dir. İçi boş fiber teğet akışlı mikrofiltrasyon, yüksek yoğunluklu hücre kültürü ortamı gibi yüksek katı içerikli sıvıyı doğrudan işleyebilir, daha az adım ve basit bir işlemle santrifüjleme ve ön filtreleme adımlarını ortadan kaldırabilir, membran temizleme yoluyla tekrar tekrar kullanılabilir, ekipman yatırımını ve işletmeyi azaltır modüler otomatik üretimin gereklilikleri doğrultusunda maliyetler.

Konsantrasyon ve saflaştırma

Ön açıklamanın ardından, virüs kültürü ortamı hala kusurlu parçacıklar, viral kabuk, sitotoksin, ortam, serum ve hücre parçaları vb. dahil olmak üzere çok sayıda safsızlık içermektedir. Bu safsızlıklar hayvanlara enjekte edilirse, yalnızca ilacın etkinliğini etkilemekle kalmayacaktır. aşı, aynı zamanda konakçıda güçlü bir bağışıklık tepkisine neden olur ve hatta aşılanan hayvanların ölümüne yol açar. Bu nedenle, heteroproteinler ve hücre parçaları gibi yabancı maddeleri uzaklaştırmak, etkili bağışıklık tepkilerini geliştirmek ve teşvik etmek, kullanılan aşı miktarını azaltmak ve olumsuz reaksiyonları azaltmak için konsantrasyon ve saflaştırmaya ihtiyaç vardır.

Virüs saflaştırma ilkesi: Virüsün biyolojik aktivitesini ve enfektivitesini öncül olarak korumak, virüs safsızlıklarını gidermek ve virüsün yüksek saflığını çıkarmak.

Şu anda büyük ölçekli üretimde kullanılan ana konsantrasyon ve saflaştırma yöntemleri ultrafiltrasyondur.

Ultrafiltrasyon yöntemi, esas olarak teğet akışlı ultrafiltrasyon cihazı, içi boş fiber filtreleme sistemi ve diğer filtreleme ekipmanlarını kullanır, normal koşullar altında ultrafiltrasyon yönteminin uygulanması, virüsün 100 kattan fazla konsantre olmasını sağlayabilir, heteroproteinin giderilme oranı% 99'a kadar çıkabilir. Bunlar arasında içi boş fiber membran filtrasyon teknolojisi, hafif ve düşük kesme kuvveti, kolay tıkanma, esnek çalışma, uzun ömür ve düşük maliyet ve kolay amplifikasyon avantajlarına sahiptir, bu nedenle virüs konsantrasyonu ve saflaştırılması için içi boş fiberin seçilmesi önerilir.

Konsantrasyon ve saflaştırma için ultrafiltrasyon yöntemi kullanıldığında, konsantrasyonun verimliliğini ve kalitesini doğrudan belirleyen uygun membran gözenek boyutunun seçilmesi çok önemlidir. Bir yandan, verimi sağlamak için hedef molekülleri etkili bir şekilde yakalamak için membran açıklığının seçilmesi gerekirken, diğer yandan heteroproteinlerin uzaklaştırma etkisi ve işlem hızı tam olarak dikkate alınmalıdır. Bu nedenle en iyi prensip, hedef molekülü tutabilecek en büyük gözenek boyutuna sahip membranı seçmek ve düzgün gözenek boyutu dağılımına sahip filtre membranını seçmeye çalışmaktır.

Domuz salgını ishal virüsü (PEDV) ve bulaşıcı gastroenterit virüsü (TGEV), çapları 60 ila 190 nm arasında değişen, baş aşağı diken benzeri sivri uçlara sahip polimorfik küreler olan koronavirüslerdir. Rotavirüs hastalığı, rotavirüsün (RV) tekerlek benzeri bir görünüme sahip olduğu ve yaklaşık 70 nm çapında olduğu zoonotik bir hastalıktır. Bu üç virüs genel olarak 100-750kd açıklıklı ultrafiltrasyon membranları kullanılarak yakalanabilir.

Guidling Technology, biyofarmasötikler, hücre kültürü, biyomedikalin saflaştırılması ve konsantrasyonu, teşhis ve endüstriyel sıvılara odaklanan ulusal bir yüksek teknoloji kuruluşudur. Biyofarmasötikler, hücre kültürü vb. uygulama senaryolarını tam olarak karşılayan santrifüj filtre cihazlarını, ultrafiltrasyon ve mikrofiltrasyon kasetlerini, virüs filtresini, TFF sistemini, derinlik filtresini, içi boş fiberi vb. başarıyla geliştirdik. Membranlarımız ve membran filtrelerimiz, ön filtreleme, mikrofiltrasyon, ultrafiltrasyon ve nanofiltrasyonun konsantrasyonu, ekstraksiyonu ve ayrılmasında yaygın olarak kullanılmaktadır. Küçük, tek kullanımlık laboratuvar filtrelemesinden, üretim filtreleme sistemlerine, sterilite testlerine, fermantasyona, hücre kültürüne ve daha fazlasına kadar birçok ürün grubumuz, test ve üretim ihtiyaçlarını karşılamaktadır. Guidling Technology sizinle işbirliği yapmayı dört gözle bekliyor!